醋酸纤维素薄膜电泳是一种以醋酸纤维薄膜为支持物的电泳技术。这种薄膜是通过纤维素的羟基经过乙酰化反应制成的。

原理

醋酸纤维薄膜能够溶于丙酮等有机溶液中，从而形成均一细密的微孔薄膜。理想的薄膜厚度通常在0.1mm至0.15mm之间。如果薄膜太厚，会影响其吸水性和分离效果；而薄膜太薄则会降低其机械强度，容易破碎。

应用

醋酸纤维素薄膜电泳因其操作简单、快速、成本低廉等特点，已被广泛应用于血清蛋白、血红蛋白、球蛋白、脂蛋白、糖蛋白、甲胎蛋白、类固醇激素以及同工酶等多种生物分子的分离分析。虽然其分辨率不如聚丙烯酰胺凝胶电泳，但在特定的应用场景中，醋酸纤维素薄膜电泳仍具有显著的优势。

特点

- 醋酸纤维薄膜对蛋白质样品的吸附非常有限，因此不会出现“拖尾”现象，染色后背景可以完全脱色，使得各种蛋白质染色带分离清晰，提高了测定的准确性。

- 由于醋酸纤维薄膜的亲水性较小，薄膜中容纳的缓冲液也较少，因此电渗作用小，电泳时主要依靠样品本身导电，导致分离速度快，电泳时间短，通常只需45至60分钟，再加上染色和脱色，整个电泳过程可以在大约90分钟内完成。

- 灵敏度高，样品用量少。对于血清蛋白，只需要2μl的血清，即使加样体积减少到0.1μl，也能得到清晰的分离带。这一特性在临床医学检验中特别有用，可用于检测病理情况下的微量异常蛋白变化。

- 应用范围广。一些蛋白质在纸上电泳不易分离，如胎儿甲种球蛋白、溶菌酶、胰岛素、组蛋白等，使用醋酸纤维薄膜电泳可以获得较好的分离效果。

- 醋酸纤维薄膜电泳染色后，可以通过浸泡在冰乙酸、乙醇混合液或其他溶液中制作透明的干板，便于扫描定量和长期保存。

缺点

醋酸纤维素薄膜电泳相对于聚丙烯酰胺凝胶电泳来说，操作更为简单，但由于其薄膜厚度较小，样品用量很少，不适合大规模制备。

技术细节

薄膜预处理

市售的醋酸纤维薄膜通常是干膜片。为了确保电泳的成功，薄膜的浸润和选择非常重要。将干膜片漂浮在电极缓冲液表面上，以便选择膜片的厚度和均匀度。如果漂浮15秒至30秒后，膜片吸水不均匀，出现白斑点或条纹，说明膜片厚薄不一致，应该弃之不用，因为这可能会影响电泳后区带的形状和清晰度。醋酸纤维薄膜的亲水性小于纸张，因此至少需要浸泡30分钟才能确保膜片上含有足够的缓冲液，并恢复其原有的多孔网状结构。最佳的方法是让漂浮在缓冲液上的薄膜充满缓冲液后自然下沉，这样可以去除膜片上的小气泡。点样时，应将膜片表面多余的缓冲液用滤纸吸去，以避免过多的缓冲液导致样品扩散。但是也不要吸得过干，否则样品可能无法进入薄膜的网孔，导致电泳起点不整齐，影响分离效果。吸取的水量应该是既不过干也不过湿的状态。为了避免指纹污染，取膜时应戴上手套或使用镊子。

缓冲液选择

醋酸纤维素薄膜电泳通常使用pH8.6的巴比妥缓冲液，其浓度在0.05mol/L至0.09mol/L之间。选择适当的缓冲液浓度取决于样品特性和薄膜的厚度。一般来说，首先确定一个初始浓度，然后根据电泳槽两端的膜长度调整电压和电流强度。如果电泳过程中电压或电流不符合预期，可能是缓冲液浓度不当，此时需要相应地增加或稀释缓冲液浓度。缓冲液浓度过低会导致区带泳动速度快并扩散变宽；而缓冲液浓度过高会使区带泳动速度慢，区带分布过于集中而不易分辨。

加样量

样品添加的数量与电泳条件、样品性质、染色方法和检测手段的灵敏度密切相关。通常，检测方法越灵敏，所需的样品量就越少，这对分离有利。如果样品量过多，可能会导致电泳后区带分离不明显，甚至相互干扰，染色也会更耗时。例如，对于电泳后用洗脱法定量的情况，每厘米加样线上需要加入0.1μl至0.5μl的样品，相当于5μg至1000μg的蛋白质。在血清蛋白常规电泳分离时，每厘米加样线上的样品不应超过1μl，相当于60μg至80μg的蛋白质。然而，对于糖蛋白和脂蛋白电泳，样品量应适当增加。对于每种样品，都需要预先进行试验来选择最佳的加样量。点样的好坏是获得理想图谱的关键步骤之一。使用印章法加样时，动作应轻柔稳定，力度适中，以避免损坏薄膜或产生凹陷，从而影响电泳区带的分离效果。

电量选择

电泳过程中应选择合适的电流强度，一般电流强度应在0.4mA/cm至0.5mA/cm的范围内。电流强度过高，尤其是在高温环境下，可能导致蛋白质变性或因热量引起的缓冲液中水分蒸发，从而使缓冲液浓度升高，最终导致膜片干涸。电流过低则会使样品泳动速度缓慢且易于扩散。

染色液选择

醋酸纤维素薄膜电泳后的染色应根据样品特点进行选择。原则上，染料应对被分离样品具有强着色能力，背景易于脱色；应尽可能选择水溶性染料，避免使用醇溶性染料，以防引起醋酸纤维素膜溶解。染色时间应适当控制。长时间染色会导致薄膜底色加深，难以脱色；而短时间染色可能会导致着色浅，难以区分，或者造成条带染色不均匀，必要时可以进行复染。

透明及保存

透明液应现用现配，以避免冰乙酸和乙醇挥发影响透明效果。这些试剂最好选用分析纯。透明前，薄膜应彻底干燥。透明时间应掌握好，如果在透明乙液中浸泡时间过长，薄膜可能会溶解；而时间过短则透明度可能不足。透明后的薄膜应完全干燥后再浸入石蜡中，使薄膜软化。如果有水残留，液体石蜡可能不易浸入，薄膜也可能不易展开。

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